Neomisin biasanya digunakan sebagai penyediaan topikal seperti Neosporin (neomisin/polymyxin B/bacitracin). Antibiotik juga boleh diberikan secara lisan, di mana ia biasanya digabungkan dengan antibiotik lain. Neomisin tidak diserap dari saluran gastrousus dan telah digunakan sebagai langkah pencegahan ensefalopati hepatik dan hiperkolesterolemia. Dengan membunuh bakteria dalam saluran usus, Neomisin mengekalkan paras ammonia yang rendah dan menghalang ensefalopati hepatik, terutamanya sebelum pembedahan gastrousus.[perlu rujukan]

Waksman dan Lechevalier pada asalnya menyatakan bahawa neomisin aktif terhadap bakteria tahan streptomisin serta Mycobacterium tuberculosis, agen penyebab tuberkulosis.[5] Neomisin juga telah digunakan untuk merawat pertumbuhan berlebihan bakteria usus kecil. Neomisin tidak diberikan melalui suntikan kerana ia sangat nefrotoksik (merosakkan fungsi buah pinggang), termasuk dalam kalangan aminoglikosida lain. Pengecualian diberi apabila neomisin dimasukkan dalam kuantiti yang kecil sebagai pengawet dalam sesetengah vaksin – biasanya 25 μg setiap dos.[6]

Spektrum

Sama seperti aminoglikosida lain, neomisin mempunyai aktiviti yang sangat baik terhadap bakteria gram-negatif, dan sebahagiannya berkesan terhadap bakteria gram-positif. Ia beracun kepada manusia secara relatif, dengan tindak balas alahan dicatatkan sebagai tindak balas buruk lazim (lihat: hipersensitiviti). Doktor kadangkala mengesyorkan menggunakan salap antibiotik tanpa neomisin seperti Polysporin.[7] Senarai berikut mewakili data kerentanan kepekatan perencatan minimum (MIC) bagi beberapa bakteria gram-negatif utama dalam perubatan.[8]

• Enterobacter cloacae : >16 μg/ml
• Escherichia coli : 1 μg/ml
• Proteus vulgaris : 0.25 μg/ml